临床医学检验技士备考资料:抗血清的鉴定
动物血采集后,立即分离出血清,此抗血清在保存或应用前,必须作效价和特异性鉴定。
(一)双向免疫扩散法鉴定抗体的特异性
按双向免疫扩散技术打两排孔,上排放抗原粗提物(如抗原来自动物血清则放相应的混合血清)和纯化抗原,下排加抗血清,进行双扩散18~24h后,仔细观察上下两排孔之间出现的沉淀线。若与粗抗原及纯抗原之间皆出现一条沉淀线,且两者互相融合,则证明该动物已产生单价特异性抗体;不出现沉淀线,表明示免疫成功。若与纯化抗原出现一条,而与粗抗原出现多条线,且其中一条沉淀线与纯抗原沉淀线相连接,也是成功的'免疫,待取血后将杂抗体吸收去除,可以成为单价特异性抗体。
(二)双向免疫扩散法则定抗血清效价
测定抗血清效价有两种稀释方法:一是稀释抗血清,如1/2、1/4、1/8、1/16对倍稀释,分别与一个浓度的纯抗原反应;另一是稀释抗原,即把抗原作对倍稀释或按浓度(如mg/ml)进行稀释,分别与不同浓度的抗血清进行双扩散试验(称为棋盘滴定),见表10-1。
表10-1抗血清效价测定
表中+~+++代表出现沉淀线的浓度,如1:8抗体出现中等浓度沉淀线,与1:16、1:32则出现较弱的沉淀线。按表10-1的互为比例稀释后确定抗血清的效价为1:32,最佳抗原浓度为1:16。效价在1:8以上即可采用于一般试验。
(三)其他鉴定方法
有时,因抗原特殊,沉淀线不易出现,特别是制备的抗血清将用于某种试验时,则考虑用其它方法(如血凝试验、抑制试验、中和试验、放射免疫技术等)测定其效价。
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